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Elisa試劑盒、elisa實(shí)驗(yàn)原理是什么?
elisa實(shí)驗(yàn)原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過(guò)物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待檢標(biāo)本,通過(guò)酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。
ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)(包含免疫熒光技術(shù),免疫放射技術(shù),免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù))中的一種,已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實(shí)驗(yàn)中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可以測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和酶作用的底物。
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢驗(yàn)方法。
檢測(cè)方法
一、雙抗體夾心法
該方法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原,因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
二、競(jìng)爭(zhēng)法
該方法一般用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì),當(dāng)然,這種方法也可以用來(lái)檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)時(shí),由于空間位阻的影響,使得該檢測(cè)方法沒(méi)有雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)靈敏度高。
三、間接法測(cè)抗體
本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。
四、雙抗原夾心法測(cè)抗體
雙抗原夾心法與間接法都可以對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)。
五、捕獲法測(cè)抗體
將抗IgM抗體包被于固相微孔板,用無(wú)關(guān)蛋白載體對(duì)未結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行封閉后,加入待測(cè)樣本,接著加入抗原物質(zhì),然后加入針對(duì)該抗原的經(jīng)生物素標(biāo)記的特異性抗體和HRP標(biāo)記的鏈霉親和素,經(jīng)TMB底物顯色和終止反應(yīng)后即可計(jì)算濃度。
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